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研究生：	吳俊學 Chun-Hsueh Wu
論文名稱：	線上掃集濃縮毛細管微胞電泳層析法對老鼠血清中皮質固酮之定性定量分析 ANALYSIS OF CORTICOSTERONE IN RAT AND MOUSE PLASMA BY A SWEEPING TECHNIQUE USING MICELLAR ELECTROKINETIC CHROMATOGRAPHY
指導教授：	林震煌 Lin, Cheng-Huang
學位類別：	碩士 Master
系所名稱：	化學系 Department of Chemistry
論文出版年：	2002
畢業學年度：	90
語文別：	中文
論文頁數：	80
中文關鍵詞：	皮質固酮
英文關鍵詞：	corticosterone, non- and stressed mouse, plasma, sweeping, micellar electrokinetic chromatography
論文種類：	學術論文
相關次數：	點閱：192 下載：11
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本研究以毛細管電泳紫外光吸收法使用十二烷基硫酸鈉（Sodium dodecyl sulphate, SDS）為介面活性劑，來量測老鼠血中的皮質固酮（corticosterone），並利用毛細管掃集濃縮法（sweeping）來當作樣品線上濃縮技。最佳的線上濃縮和分離條件已經被探討。當使用光陣列二極體在波長247 nm為確認時，最低偵測極限為5 ng/mL （S/N=3）。在真實樣品的分析當中，皮質固酮可以分別從受壓力（stressed）與未受壓力（non-stressed）的老鼠血中測定的到。此方法所顯現之結果為，在未受壓力老鼠血中皮質固酮濃度僅有 ~ 52 ng/mL，在受壓力老鼠中則明顯的增加為 ~ 218 ng/mL。本方法可以發展成為檢驗動物體中，壓力指標物皮質固酮之濃度，也可以用於評估藥物治療對於減緩壓力之影響。

The separation and on-line concentration of corticosterone in mouse blood was achieved by means of capillary electrophoresis/UV absorbance using sodium dodecyl sulfate (SDS) as the surfactant. The procedure involved the use of an on-line sample concentration method by sweeping-micellar electrokinetic chromatography (sweeping-MEKC). The optimal on-line concentration and separation conditions were determined. The detection limit for this method was 5 ng/mL (S/N=3) and a photodiode array detection at 247 nm was used for identification. In an analysis of an actual sample, corticosterones from blood samples of a non- and stressed mouse were determined. The results show that only a minor amount of corticosterone (~ 52 ng/mL) was produced by a non-stressed mouse, whereas a significantly amount of corticosterone (~ 218 ng/mL) was present in a blood sample from a stressed mouse. The method developed here can be used to examine corticosterone levels as a marker of stress in test animals and may also be used for estimating the effect of stress-release medications.

目錄
Abstract i
中文摘要 ii
目錄 iii
圖目錄 v
表目錄 vi
第一章 序論
1-1 研究目的 1
1-2 荷爾蒙（Hormone）的簡介 3
1-2-1 荷爾蒙的功能與種類 3
1-2-2 固醇類荷爾蒙的生成 5
1-3 皮質固酮簡介 8
1-3-1 皮質固酮之功能 8
1-3-2 皮質固酮的生成 8
1-4 皮質固酮傳統的分析方法 10
1-4-1 放射性免疫法 10
1-4-2 層析法 12
1-5 本研究採用毛細管電泳掃集法的原因 13
第二章 原理及方法 15
2-1 毛細管電泳發展史 15
2-2 毛細管電泳分離的優點 16
2-3 毛細管電泳的分離原理 18
2-3-1 電泳分離與淌度 18
2-3-2 電滲流（EOF） 18
2-3-3 管柱分離效率與解析度 21
2-4 毛細管電泳基本分離模式 23
2-4-1毛細管區帶電泳法（CZE） 23
2-4-2 膠束電動層析法（MEKC） 24
2-5 毛細管電泳對於固酮類之分析方法簡介 28
2-6 毛細管電泳之線上濃縮技術簡介 29
2-7 毛細管電泳掃集法（Sweeping）之原理 31
第三章 儀器及藥品 34
3-1 毛細管電泳儀 34
3-2 毛細管的處理 36
3-2-1 新毛細管的活化 36
3-2-2 每日實驗毛細管的處理 36
3-2-3 實驗操作條件 36
3-3 儀器及其週邊設備 38
3-4 藥品及溶劑 39
3-5 老鼠之來源與血清樣品之處理 40
3-5-1 老鼠的取得 40
3-5-2 代謝性壓力實驗 40
3-5-3 血清樣品的處理 41
第四章 實驗結果與討論 42
4-1溶液之配製與真實樣品之前處理 42
4-1-1 標準品之配製 42
4-1-2 緩衝溶液（running buffer）之配製 42
4-1-3 樣品機質溶液之配製（sample matrix） 43
4-1-4 內標物之添加與血清樣品之前處理 43
4-1-5 活性碳處理之血清樣品 44
4-2 毛細管電泳掃集法（sweeping）最佳樣品堆積條件分析 47
4-2-1 介面活性劑濃度對標準品分離效果之影響 47
4-2-2 有機修飾劑甲醇對血清樣品分離之影響 47
4-2-3 進樣時間與理論板數之探討 50
4-3 標準品檢量線之製作 54
4-4 操作條件再現性之探討（RSD） 56
4-5 濃縮效果與偵測極限之探討 57
4-6 血清樣品之分析 60
4-6-1 真實樣品之定量方法 60
4-6-2 萃取回收率之探討 61
4-6-3 使用標準添加法量測老鼠血清中之皮質固酮 62
4-7 真實樣品之分析 65
4-7-1 對於受壓力與未受壓力老鼠血清之分析 65
4-7-2 接受不同壓力刺激後老鼠血清之分析 68
4-7-3 分析施打不同劑量2-DG老鼠血清之結果 71
第五章 結論 72
5-1 標準品方面結論 72
5-2 血清樣品方面結論 72
發表論文 74
參考文獻 75
附錄1. 毛細管電泳儀操作說明 76
附錄2. 毛細管電泳對無機陰陽離子之分離 77
附錄3. GC-MS與本方法定量之結果比較 78
圖目錄
第一章
圖 1-1 皮質固酮與氫基皮質酮 2
圖 1-2 生物體中固醇類賀爾蒙之合成途徑 4
圖 1-3 腎上腺皮質促素（ACTH）的作用機制 9
圖 1-4 放射性免疫法競爭性原理示意圖 11
第二章
圖 2-1 管柱內流動的示意圖及相對溶質的區帶 17
圖 2-2 毛細管電泳之基本組件圖 17
圖 2-3 毛細管壁因帶電荷而形成電雙層及zeta電位示意圖 19
圖 2-4  EOF的形成及流動示意圖 20
圖 2-5 層析圖譜之譜峰底寬及遷移時間之示意圖 22
圖 2-6 在CZE的分離模式下，不同粒子的遷移圖 24
圖 2-7  MEKC分離模式下，不同粒子的遷移 26
圖 2-8 掃集法sweeping 分離機制示意圖 33
第三章
圖 3-1 毛細管電泳儀氘燈光譜圖 35
第四章
圖 4-1  血清樣品萃取流程圖 45
圖 4-2  皮質固酮與內標之紫外光吸收光譜圖 46
圖 4-3  SDS濃度對層析結果之影響 48
圖 4-4  不同比例之甲醇對血清樣品層析結果之影響 49
圖 4-5  不同注射秒數之電泳層析圖 52
圖 4-6  注射秒數與譜峰面積與理論板數之關係 53
圖 4-7  皮質固酮與內標物之檢量線圖 55
圖 4-8  使用掃集法與未使用掃集法比較 58
圖 4-9  添加不同濃度之皮質固酮於未受壓老鼠血液中之電泳層析圖 63
圖 4-10 標準添加法之檢量線圖 64
圖 4-11 受壓力與未受壓力小白鼠之血清電泳層析圖 67
圖 4-12 接受不同壓力刺激後，老鼠之血清電泳層析圖 69
圖 4-13 接受不同壓力刺激後，老鼠血液中皮質固酮濃度變化圖 70
圖 4-14 施打不同濃度2-DG後，老鼠血液中皮質固酮濃度變化圖 71
表目錄
第一章
表 1-1 血清中各種類固醇類賀爾蒙之濃度 6
表 1-2 尿液中各種類固醇類賀爾蒙之濃度 7
表 1-3 利用各種方法量測血液中皮質固酮濃度之比較 13
第二章
表 2-1 毛細管電泳分離模式 27
表 2-2 各種毛細管電泳線上濃縮技術 30
第三章
表 3-1 毛細管每次分析之清洗程序 37
第四章
表 4-1 磷酸水溶液樣品之注射時間，長度與總體積關係表 50
表 4-2 毛細管電泳掃集法之再現性探討 56
表 4-3 使用掃集法與未使用掃集法之比較 59
表 4-4 皮質固酮之萃取回收率與準確度 61
表 4-5 未受壓力小白鼠與受壓力小白鼠同日與異日之定量結果 66
                                

[1] V. H. T. James, J. W. Honour, R. Fraser, H. L. J. Makin, D. B. Gower, D. N. Kirk (Eds.), Steroid Analysis, Blackie Academic & Professional, Galsgow, 1995, p. 229, Chapter 4.
[2] E. A. Young, Psychoneuroendocrinology 20 (1995) 771.
[3] 源自http://content.edu.tw/senior/bio/tc_md/sa/sa2/sa23.htm 激素的定義
[4] 專題報導幾種小分子藥物對類固醇激素合成與分泌的影響王錫岡/陽明大學生理學研究所
[5] 源自http://www.redox.com.tw/assessmented1a.htm腎上腺皮質壓力分析, 2000
[6] 探討安神中藥-柏子仁對小白鼠之免疫功能的影響廖慧玲/輔大生命科學系
[7] 吳茱萸鹼及吳茱萸次鹼對雄性大鼠腎上腺皮質小球帶細胞分泌醛固酮之效應洪珮瑄/陽明大學生理學研究所
[8] J.Obenberger, L. Starka, R. Hampl, Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 183 (1971) 203
[9] L. Starka, J. Kolin, J.Obenberger, J. Ophthalmic Res. 7 (1975) 303
[10] 臨床化學第二版何敏夫著 (1998)
[11] E. Canalis, G.E. Reardon, A.M. Caldarella, Clin. Chem. 28(1982) 2418–2420.
[12] M. Schoneshofer, A. Fenner, G. Altinok, H.J. Dulce, Clin. Chim. Acta. 106 (1980) 63–73.
[13] M. Flore, J. Mitchell, T. Doan, Clin. Chem. 34 (1988) 1726–1732.
[14] Y.N. Yong, B.M. Chien, A.P. D’mello, J. Chromatogr. B 661 (1994) 211
[15] C.J.H. Woodward, P.W. Emery, J. Chromatogr. 419 (1987) 280
[16] M. Hariharan, S. Naga, T. VanNoord, E.K. Kindt, Clin. Chem. 38 (1992) 346
[17] M. Hariharan, S. Naga, T. VanNoord, E.K. Kindt, Clin. Chem. 613 (1993) 195
[18] M. Hay, P. Mormede, J. Chromatogr. B 702 (1997) 33
[19] S.R. Mason, L.C. Ward, P.E. Reilly, J. Chromatogr. 581 (1992) 267
[20] D. Glick, D.V. Redlich, S. Levine, Endocrinology 74(1964) 653
[21] A. Ghulam, M. Kouach, A. Racadot, A. Boersma, M.C. Vantyghem, G. Briand, J. Chromatogr. B 727 (1999) 227
[22] A. Marwah, P. Marwah, H. Lardy, J. Chromatogr. B 757 (2001) 333
[23] J. kobberling, A. von Zur Muchlen, J. Clin. Endocrinol. Metab., 38(1974)313
[24] A. Sunde, P. Stenstad, K. B. Eik-Nes, J. chromatogr., 175(1979)219
[25] Steroid hormones a practical approach, B Green and R E leake, 1987
[26] A. Marwah, P. Marwah, H. Lardy, J. Chromatogr. B 757 (2001) 333.
[27] A. Ghulam, M. Kouach, A. Racadot, A. Boersma, M.C. Vantyghem, G. Briand, J. Chromatogr. B 727 (1999) 227.
[28] I. Miksik, M. Vylitova, J. Pacha, Z. Deyl, J. Chromatogr. B 726 (1999) 59.
[29] Z. Iqbal, J.M. Midgley, D. G.Watson, J. Pharmaceut. Biomed. Anal. 24 (2001) 535.
[30] J. M. Midgley, D. G. Watson, T. M. Healey, C. N. J. McGhee, Biomed. Environ. Mass Spectrom. 18 (1989) 657.
[31] J. M. Midgley, D. G. Watson, T. M. Healey, C. N. J. McGhee, Biomed. Environ. Mass Spectrom. 15 (1988) 479.
[32] J. P. Quirino, S. Terabe, Science 282 (1998) 465.
[33] J. P. Quirino, S. Terabe, Anal. Chem. 71 (1999) 1638.
[34] J. P. Quirino, S. Terabe, Anal. Chem. 72 (2000) 1023.
[35] J. -B. Kim, K. Otsuka, S. Terabe, J. Chromatogr. A 932 (2001) 129.
[36] J. P. Quirino, S. Terabe, P. Bocek, Anal. Chem. 72 (2000) 1934.
[37] J. Palmer, D. S. Burgi, N. J. Munro, J. P. Landers, Anal. Chem. 73 (2001) 725.
[38] J. -B. Kim, J. P. Quirino, K. Otsuka, S. Terabe, J. Chromatogr. A 916 (2001) 23.
[39] J. -B. Kim, K. Otsuka, S. Terabe, J. Chromatogr. A 912 (2001) 343.
[40] R. B. Taylor, R. G., Reid, A. S. Low, J. Chromatogr. A 916 (2001) 201.
[41] C. Fang, J. -T. Liu, C. –H. Lin, J. Chromatogr. B (2002) in press.
[42] J. Palmer, N. J. Munro, J. P. Landers, Anal. Chem. 71 (1999) 1679.
[43] A. Ghulam, M. Kouach, A. Racadot, A. Boersma, M.C. Vantyghem, G. Briand, J.
Chromatogr. B 727 (1999) 227.
[44] A. Marwah, P. Marwah, H. Lardy, J. Chromatogr. B 757 (2001) 333.
[45] R. Mehvar, R. O. Dann, D. A. Hoganson, J. Pharm. Biomed. Anal. 22 (2000) 1015.
[46] T. K. H. Pedersen, Å. M. Hansen, S. P. Lund, A. H. Garde, Anal. Chim. Acta, 413 (2000) 63.
[47] R. G. Lumbreras, R. I. Hornillos, J. Chromatogr B 742 (2000) 47.
[48] M. Hay, P. Mormede, J. Chromatogr. B 702 (1997) 33.
[49] C. J. H. Woodward, P. W. Emery, J. Chromatogr. 419 (1987) 280
[50] H.Z. Helmholtz, Anal. Phys. Chem., 1879, 7, 337
[51] P. Jandik and G. Bonn, Capillary Electrophoresis of Small
Molecules and Ions, VCH, New York, 1993.
[52] S. Terabe, K. Otsuka, K. Ichikawa, A. Tsuchiya and T. Ando, Anal. Chem., 56 (1984), 111.
[53] B. Krattiger, G. J. M. Bruin, and A. E. Bruin, Anal. Chem. 66 (1994) 1.
[54] M. Stefansson and M. Novotny, Anal. Chem. 66 (1994) 1134.
[55] Y. Kim and M. D. Morris, Anal. Chem. 66 (1994) 1168.
[56] Z. Zhao, A. Malik, and M. L. Lee, Anal. Chem. 65 (1994) 2747.
[57] S. Terabe, Y. Ishihama, H. Nishi, T Fukyama and K. Otsuka, J. Chromatogr., 545 (1991) 359.
[58] H. Nishi, M. Matsuo, J. Liq. Chromatogr., 14 (1991) 973-986.
[59] N.W. Smith, M.B. Evans, J. Pharm. Biomed. Anal., 12 (1994) 579-611.
[60] J. Vindevogel, P. Sandra, Anal. Chem., 63 (1991) 1530-1536.
[61] M.G. Quaglia, E. Bossu, C. Desiderio, S. Fanali, Farmaco, 49 (1994) 403-406.
[62] O.H. Wheeler, Girard and Related Reagents, Holden Day, San Francisco, 1967.
[63] M. Albin, P.D. Grossman and S.E. Moring, Anal. Chem. 65(1993)489A.
[64] D.B. Crig, J.C. Y.Wong, N.J. Dovichi, Anal. Chem., 68(1996) 697
[65] J. P. Chervet, R. E. J. Van soest, M. Ursem, J. Chromatogr., 543(1991)439
[66] T, Wang, H. J. Aiken, C. W. Huie, R. A. Hartwick, Anal. Chem., 63(1991)1372
[67] D. N. Heiger, M. Herold, R. Grimm, Applications of Hewlett-Packard 3D Capillary Electrophoresis System, vol. 1, Hewlett-Packard, Waldbronn, 1992.
[68] A. Engstron, P.E. Andersson, B. Jesefsson, Anal.Chem., 67(1995) 3018
[69] Tarabe J.P. Quirino, S. Terabe, Science 282 (1998) 465.
[70] W.C. Engeland, J. Shinsako, C.M. Winget, J. Vernikos-Danel-lis, M.F. Dallman, Endocrinology 100 (1977) 138
[71] M.F. Dallman, M.T. Jones, Endocrinology 92 (1973) 1367

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