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研究生: 翁惠珍
WENG,HUI-ZHEN
論文名稱: Hz-1核多角體病毒潛伏感染特異基因起動子的探討
指導教授: 李銘亮
Li, Ming-Liang
趙裕展
Zhao, Yu-Zhan
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 生命科學系
Department of Life Science
畢業學年度: 79
語文別: 中文
論文頁數: 58
中文關鍵詞: 核多角體病毒特異基因起動子動物病毒桿狀病毒科鱗翅目昆蟲轉錄轉制
英文關鍵詞: DELETION CLONES
論文種類: 學術論文
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  • HZ-1核多角體病毒屬於動物毒中的桿狀病毒科, 核多角體病毒屬中的C 亞屬, 是一種
    感染鱗翅目昆蟲的常見病毒, 具有228.3Kb 雙股環狀的DNA 基因體。
    分析Hz-1病毒潛伏感染時的基因表現, 發現只有某個基因持續地轉錄出RNA , 其他基
    因都被 "關掉" 了, 顯然, 這個基因與潛伏感染的建立或維持有相當密切的關係, 我
    們稱之為Persistency-Associate-Gene-l:PAG1 , 而由之轉錄出的RNA 則為Persiste
    ncy-Associated-Transcript-1: PAT1。
    PAT1亦出現在急性感染情況中, 且在感染兩小時即出現, 似乎PAG1是屬於最早表現的
    immediateearly genes(IE genes), 但是, PAG1與其他IE genes的表現模式又完全不
    同, 而且PAG1可能不轉譯蛋白質, 而以RNA 的型式來行使其特殊功能( 潛伏感染與抗
    病毒) ; 基於多種原因我們推測: PAG1屬於一種截然不同的IE genes, 是由不同的轉
    錄機制所控制, 本實驗即欲從其起動子著手, 來探討PAG1的轉錄情形。
    先運用基因選殖技術, 將預測的PAG1起動子取下, 接上易偵測表現情況的報告基因:
    ChloramphenicolAcetyl Transferase:構築成質體pPP-CAT , 再送進其寄主細胞內,
    直接作CAT assay來反應起動子的功能; 實驗結果, pPP-CAT在三種Hz-1寄主細胞的正
    常細胞株中並不表現; 考慮到PAG1起動子是否需要額外的因子以cis-actingor trans
    -acting 的方式提供協助, 於是嘗試將pPP-CAT 送進潛伏感染細胞株, 或經PAG1轉形
    的細胞株中, 或在正常細胞的急性感染狀況中, 但都偵測不到CAT 活性; 然而pPP-CA
    T 卻在果蠅細胞株中具有相當高的表現量; 另外構築的一些涵蓋範圍不同的質體也無
    法在Hz-1寄主細胞株內表現出CAT 活性, 但在果蠅細胞株(SL-2)內卻各有不同的表現
    量。
    為再一步證實起動子區域的正確性, 便用先導物延長法來尋找轉錄起點, 而找出的轉
    錄起點, 雖與前人所作RNase protection的結果不甚吻合, 但由之推測的起動子範圍
    卻相去不遠。
    再利用含有PAG1 codingregion的質體: pHzE-M 為材料, 在轉錄起點前作不同程度的
    刪剪, 形成三個deletionclones導入正常細胞內, 均與pHzE-M一樣, 會轉錄出PAT1,
    且四者產生PAT1的量沒有顯著差異。
    由於一直無法在Hz-1病毒寄主細胞中偵測到CAT 活性, 但卻能在保留轉錄起點上游60
    0 bases 時偵測到PAT1, 於是我們懷疑: 是不是PAG1本身即存在著一個轉譯控制區,
    不管這個控制區是在PAG1的5'end , 或構造基因區, 或是3'end , 這個可能性都因PA
    G1的蛋白質產物未被發現而大大地升高, 但仍需要更進一步的實驗來證實。

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