簡易檢索 / 詳目顯示

研究生: 王智偉
Chih-Wei Wang
論文名稱: 利用金奈米材料作為siRNA的保護劑與其在基因傳輸上之應用
Using Gold Nanomaterials as Protection of siRNA and their Application in Gene Delivery
指導教授: 陳家俊
Chen, Chia-Chun
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2006
畢業學年度: 94
語文別: 中文
中文關鍵詞: 金奈米粒子小片段干擾核醣核酸
論文種類: 學術論文
相關次數: 點閱:199下載:0
分享至:
查詢本校圖書館目錄 查詢臺灣博碩士論文知識加值系統 勘誤回報
  • RNA干擾作用是沉靜導致疾病的基因,而達到治療疾病的重要技術之ㄧ,然而因為RNA比DNA還容易被分解,所以如何有效率的將siRNA轉殖到細胞內是RNAi技術的重要關鍵。結合奈米科技與生物技術,許多功能性的奈米材料被用來作為基因傳輸新型的非病毒載體。在此我們發展了一個新穎的方法,藉由結合的金奈米材料-siRNA來保護小片段干擾核醣核酸(siRNA)免受於被分解。
    我們分別合成正電荷金奈米材料(1)3.5nm金奈米粒子藉由包覆一層具有陽離子的thiocholine使粒子表面帶正電荷,及(2)使用CTAB合成金奈米棒。使得EGFP siRNA可以容易的金奈米材料結合。當我們把EGFP siRNA單獨與核苷酵素(RNase)培養會發現siRNA幾乎完全被分解,而結合金奈米粒子的siRNA將會受到保護。進ㄧ步,我們將此結合金奈米粒子的EGFP siRNA餵入含有EGFP的COS7細胞中,發現會產生RNA干擾的機制,造成EGFP基因的沉靜。結論,我們合成正電荷金奈米粒子可用來作為siRNA的保護劑並可應用於siRNA的基因傳輸。

    目錄 總目錄………………………………………………………………….....Ⅰ 中文摘要………………………………………………………………..Ⅲ 英文摘要……..………………………………………….………….......Ⅳ 第一章 緒論……………………………………………………………..1 1-1 引言……………………………………………..………………1 1-2 奈米材料的簡介………………………………..………………2 1-3 奈米材料之合成……………………………………..…………6 1-4 金奈米材料之合成…………………………………..…………8 1-5 基因傳輸系統…………………………………………………12 1-6 RNA Interference……………………………………………...14 第二章 實驗……………………………………………………………17 2-1 研究動機與目的…………………………………………..…..17 2-2 實驗藥品與儀器………………………………………………18 2-2-1 實驗藥品…………………………………………………...18 2-2-2 實驗儀器…………………………………………………...19 2-3 步驟……………………………………………………………20 2-3-1 正電荷金奈米粒子的合成………………………………...20 2-3-2 金奈米棒的合成………………………………………...…21 2-3-3 金奈米材料修飾螢光染劑………………………………...22 2-3-4 金奈米材料結合siRNA……………………………………23 2-3-5 金奈米材料對EGFP siRNA保護的測試…………………24 2-3-6 金奈米材-siRNA結合物抑制細胞中基因的表現………...25 第三章 結果與討論……………………………………………………28 3-1 材料性質之分析………………………………………………….28 3-1-1 正電荷金奈米粒子…………………………………….......28 3-1-2 合成之金奈米棒…………………………………………...30 3-1-3 金奈米材料修飾螢光染劑………………………………...31 3-1-4 siRNA與金奈米材料的結合…………………….…………34 3-2 金奈米材料作為EGFP siRNA保護劑…………………………..37 3-3 奈米材料作為EGFP siRNA的基因載體…………….………….39 3-3-1 培養穩定的EGFP COS7細胞………………….………….39 3-3-2 金奈米材料-EGFP siRNA對EGFP基因表現的抑制…….39 3-3-3 金奈米材料的細胞存活率測試…………………………...43 第四章 結論……………………………………………………………44 第五章 未來展望………………………………………………………45 參考資料………………………………………...……………………...46

    參考文獻
    (1) (a) Bruchez, M.; Moronne, M.; Gin, P.; Weiss, S.; Alivisatos, A. P. Science 1998, 281, 2013.(b) Chan, W. C.; Nie, S. Science 1998, 281, 2016.(c) Alivisatos, A. P. Nature biotechnol. 2004, 22, 47.
    (2) (a) Thomas, M.; Klibanov, A. M. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2003, 100, 9138.(b) Yamada, T.; Iwasaki, Y.; Tada, H.; Iwabuki, H.; Chuah, M. KL; VandenDriessche, T.; Fukuda, H.; Kondo, A.; Ueda, M.; Seno, M.; Tanizawa, K.; Kuroda, S. Nature Biotechnol. 2003, 21, 885.(c) Salem, A. K.; Searson, P. C.; Leong, K. W. Nature Mater. 2003, 2, 668.
    (3) (a) Mirkin, C. A.; Letsinger, R. L.; Mucic, R. C.; Storhoff, J. J. Nature1996, 382, 607. (b)Cui, Y.; Wei, Q.; Park, H. K. ; Lieber, C. M. Science 2003, 293, 1289.
    (4) Fire, A.; Xu, S. Q.; Montgomery, M. K.; Kostas, S. A.; Driver, S. E.; Mello, C. C. Nature 1998, 391, 806.
    (5) (a)Brus, L. E.; Efros, A. L.; Itoh, T., J. Lumin., 1996, 70, R7-R8. (b) Brus, L. E. J.Phys.Chem. 1994, 98, 3575.
    (6) Ball, P. Nature, 2001, 414, 142.
    (7) (a)Majetich, S. A.; Jin, Y., Science, 1999, 284, 470. (b)Back, C. H.; Allenspach, R.; Weber, W.; Parkin, S. S. P.; Weller, D.; Garwin, E. L.; Siegmann, H. C., Science, 1999, 285, 864.
    (8) Kalyanasundaram, K.; Borgarello, E.; Duonghong, D.; Gratzel, M., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1981, 20, 987.
    (9) Link, S.; El-Sayed, M. A*. J. Phys. Chem. B 1999, 130, 4212.
    (10) Rosi, N. L.; Mirkin, C. A. Chem. Rev. 2005, 105, 1547.
    (11) Huang, X.; El-sayed, I. H.; El-sayed, M. A. J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 2115.
    (12) Link, S.; EI-Sayed, M. A.; Int. Rev. Phys.Chem. 2000, 19, 409.
    (13) Rabenau, A. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1985, 24, 1026.
    (14) (a) Han, W. Q.; Fan, S. S.; Li, Q. Q.; Hu, Y. D. Science 1997, 277, 1287. (b) Chen, C. C.; Yeh, C. C. Adv. Mater. 2000, 12, 738.
    (15) (a) Steinle, E. D.; Mitchell, D. T.; Wirtz, M.; Lee, S. B.; Young, V. Y.;Martin, C. R. Anal. Chem. 2002, 74, 2416. (b) Zhang, M.; Bando, Y.;Wada, K. J. Mater. Res. 2000, 15, 387.
    (16) (a) Martin, C. R. Science 1994, 266, 1961. (b) Pileni, M. P. Nature Materials 2003, 2, 145.
    (17) Daniel, M. C.; Astruc, D. Chem. Rev. 2004, 104, 293.
    (18) Hostetler, M. J.; Green, S. J.; Stokes, J. J.; Murray, R. W. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4212.
    (19) Koyfman, A. Y.; Braun, G.; Magonov, S.; Chworos, A.; Reich, N. A.; Jaeger, L. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 11886.
    (20) Yu, Y. Y.; Chang, S. S.; Lee, C. L.; Wang, C. R. C. J. Phys. Chem. B 1997, 101, 6661.
    (21) Kim, F.; Song, J. H.; Yang, P. J. J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 14316.
    (22) (a) Sau, T. K.; Murphy, C. J. Langmuir 2004, 20, 6414. (b) Nikoobakht, B.; El-sayed, M. A. Chem. Mater. 2003, 15, 1957. (c) Jana, N. R.; Gearheart, L.; Murphy, C. J. J. Phys. Chem. B 2001, 105, 4065. (d) Jana, N. R.; Gearheart, L.; Murphy, C. J. Adv. Mater. 2001, 13, 1389. (e) Link, S.; El-Sayed, M. A. J. Phys. Chem. B 1999, 103, 8410.
    (23) (a) Williams, D. A.; Baum, C. Science 2003, 302, 400. (b) Cavazzana-Calvo M.; Thrasher A.; Mavilio F. Nature 2004, 427, 779.
    (24) Verma, I. M.; Somia, N. Nature 1997, 389, 239.
    (25) Luo, D.; Saltzman, M. W. Nature Biotechnol 2000, 18, 33.
    (26) (a) Boyce, N. Nature 2001, 414, 677.(b) Check, N. Nature 2002, 420, 116.
    (27) (a)Hamilton, A. J.; Baulcombe, D. C. Science 1999, 286, 950. (b)Bernstein, E. et al. Nature 2001, 409, 363.
    (28) Brummelkamp, T. R. et al. Science 2002, 296, 550.

    無法下載圖示 本全文未授權公開
    QR CODE