研究生: |
周淑娥 ZHOU, SHU-E |
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論文名稱: |
穿梭載體選殖於酵母菌內之表現和穩定性 |
指導教授: |
周德源
Zhou, De-Yuan |
學位類別: |
碩士 Master |
系所名稱: |
生命科學系 Department of Life Science |
畢業學年度: | 76 |
語文別: | 中文 |
論文頁數: | 52 |
中文關鍵詞: | 穿梭載體 、酵母菌 、複製源 、營養需求基因 、出芽酵母 、裂殖酵母 |
英文關鍵詞: | REPLICATION-ORIGIN, AUXOTROPHIC-GENE, GAPOH, SACCHAROMYCES-CEREVISIAE, SCHIZOSACCHAROMYCES-POMBE |
論文種類: | 學術論文 |
相關次數: | 點閱:193 下載:0 |
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一般用於酵母菌基因選殖的穿梭載體,包含酵母的複製源(replication origin)如
2u,ars ,和用作篩選標誌的營養需求基因(auxotrophic gene)如leu ,trp ,與
大腸菌的質體如pBR322。本實驗利用GAPDH (glyceraldehye) 3-phosphate dehydrog
enase)基因的啟動子接上HBsAB 基因構築成表現重組體pGAPL15, pGAPL25和pTYC11。
將這些重組質體選殖於酵母菌內,藉助HBsAB 來分析它們表現的能力及穩定性。
pGAPL15 和pGAPL25 轉形至Saccharomyces cerevisiae及Schizosccharomyces pombe
,而pTYC11則轉形至Saccharomyces cerevisiae。
經Radioimmunoassay (RIA)測試結果以pTHG11/YNN 27 表現力最佳。質體穩定度與套
數測試結果,仍以pTHG11/YNN 27 最穩定,顯示pTHG11比pGAPL15, pGAPL25更適於選
殖於酵母菌內。對酵母菌而言,pYE8是一種很理想的穿梭質體。
當pGAPL15和pGAPL25送入出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)與裂殖酵母(Schi
zosaccharomyces pombe ),發現在裂殖酵母中表現HBsAg ,產量不高,即酵母菌的
生殖方式,對於HBsAg 基因的表現,沒有直接影響。
對酵母菌所產生的HBsAg 加以萃取、純化,得到在CsCl density gradient 的浮力密
度為1.2gcm-3而在sucrose gradient則為1.06g cm-3聚集成顆粒狀,經過SDS PAGE銀
染分析結果,其分子量約為25Kd,用電子顯微鏡來檢視HBsAg 顆粒大小約為22 nm。