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研究生: 周淑娥
ZHOU, SHU-E
論文名稱: 穿梭載體選殖於酵母菌內之表現和穩定性
指導教授: 周德源
Zhou, De-Yuan
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 生命科學系
Department of Life Science
畢業學年度: 76
語文別: 中文
論文頁數: 52
中文關鍵詞: 穿梭載體酵母菌複製源營養需求基因出芽酵母裂殖酵母
英文關鍵詞: REPLICATION-ORIGIN, AUXOTROPHIC-GENE, GAPOH, SACCHAROMYCES-CEREVISIAE, SCHIZOSACCHAROMYCES-POMBE
論文種類: 學術論文
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  • 一般用於酵母菌基因選殖的穿梭載體,包含酵母的複製源(replication origin)如
    2u,ars ,和用作篩選標誌的營養需求基因(auxotrophic gene)如leu ,trp ,與
    大腸菌的質體如pBR322。本實驗利用GAPDH (glyceraldehye) 3-phosphate dehydrog
    enase)基因的啟動子接上HBsAB 基因構築成表現重組體pGAPL15, pGAPL25和pTYC11。
    將這些重組質體選殖於酵母菌內,藉助HBsAB 來分析它們表現的能力及穩定性。
    pGAPL15 和pGAPL25 轉形至Saccharomyces cerevisiae及Schizosccharomyces pombe
    ,而pTYC11則轉形至Saccharomyces cerevisiae。
    經Radioimmunoassay (RIA)測試結果以pTHG11/YNN 27 表現力最佳。質體穩定度與套
    數測試結果,仍以pTHG11/YNN 27 最穩定,顯示pTHG11比pGAPL15, pGAPL25更適於選
    殖於酵母菌內。對酵母菌而言,pYE8是一種很理想的穿梭質體。
    當pGAPL15和pGAPL25送入出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)與裂殖酵母(Schi
    zosaccharomyces pombe ),發現在裂殖酵母中表現HBsAg ,產量不高,即酵母菌的
    生殖方式,對於HBsAg 基因的表現,沒有直接影響。
    對酵母菌所產生的HBsAg 加以萃取、純化,得到在CsCl density gradient 的浮力密
    度為1.2gcm-3而在sucrose gradient則為1.06g cm-3聚集成顆粒狀,經過SDS PAGE銀
    染分析結果,其分子量約為25Kd,用電子顯微鏡來檢視HBsAg 顆粒大小約為22 nm。

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