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研究生: 謝易修
XIE, YI-XIU
論文名稱: 草蝦肝胰臟中類甲釋素物質之研究
指導教授: 萬家茂
Wan, Jia-Mao
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 生命科學系
Department of Life Science
畢業學年度: 74
語文別: 中文
中文關鍵詞: 草蝦肝臟胰臟類甲釋素抗體結合沈澱試驗周邊環流系統
英文關鍵詞: HPLC
論文種類: 學術論文
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  • 本實驗之目的在於探求草蝦中類甲釋素(TRH )的存在性,以及其可能的分布情形,
    並進而探究此類甲釋素與現已發現的甲釋素其相似與相異之處。
    自市場購買活草蝦為15~18尾每斤(約35克至40克之間一尾),不分雌雄,購得後迅
    速運送至實驗室(常溫下)並儘速取出各個器官,經甲醇(methanol)萃取後,測其
    萃後液中類甲釋素之含量。
    以甲醇與鹽酸兩種萃取方法,從事多量肝胰臟的萃取,比較兩種萃取結果的一致性,
    類甲釋素並經色層分析(Sephadex G-25;G-10 )探究其與合成甲釋素的關係。
    在實驗中並利用高效液相層析(HPLC),甲釋素分解速率從事多種性質探討。更進而
    以抗體結合沈澱試驗,與周邊環流系統,來瞭解類甲釋素的免疫活性及生物活性。
    於萃取液類甲釋素的測定中,也加入蛋白 抑制劑,來探求蛋白 的存在性,並確保
    RIA 的可靠性。
    實驗結果顯示草蝦經甲醇萃取後,其肝胰臟的萃取液含有多量的類甲釋素,約每克肝
    胰臟含有5 ng類甲釋素的免疫活性,萃取液具有劑量反應現象,且與標準曲線平行。
    以甲醇或鹽酸兩種萃取方法,來萃取肝胰臟,其萃取過程雖然差異很大,但其結果是
    相一致的,萃取液均具有劑量反應現,且見標準曲線平行,經測試每克肝胰臟都約含
    有5 ng類甲釋素的免疫活性。
    以周邊環流系統,來瞭解類甲釋素是否具有生物活性,可看出類甲釋素具有生物活性
    ,而且類甲釋素的生物活性比其免疫活性要高。
    經抗體結合沈澱試驗,萃取液中類甲釋素的免疫活性可以降低十倍以上。但將經沈澱
    作用後的上層液拿來作生物活性測定,發現其生物活性不但沒有降低,反而有升高的
    趨勢。
    類甲釋素經色層分析(Sephadex G-25 )與(Sephadex G-10 ),發現類甲釋素的免
    疫活性峰,可與蛋白質峰明顯分開,並且與放射性標示的125I-TRH峰並不在同一位置
    ,萃取的類甲釋素析出比較快,可能其分子量,比合成甲釋素要大些。
    在高效液相層析中,由於萃取液中蛋白質或多胜 仍含量太多,因此無法得到一高純
    度的類甲釋素胜 峰,但由合成甲釋素的紫外線(UV)胜 峰,與萃取液中類甲釋素
    免疫活性峰相對照,可看出萃取的類甲釋素比合成甲釋素甲析出,由於析出溶液為極
    性溶液,所以萃取的類甲釋素具有較高的極性。
    萃取液中加以正常鼠血清,做甲釋素分解速率的探討,發現萃取的類甲釋素經25分鐘
    ,37℃的培育,其類甲釋素的免疫活性不受影響,但合成甲類素,卻已被分解,僅剩
    原來1.5 %的免疫活性。顯示,萃取液中類甲釋素,不為血清中去氨 所作用,其化
    學結構可能不同能合成甲釋素。

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