研究生: |
謝易修 XIE, YI-XIU |
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論文名稱: |
草蝦肝胰臟中類甲釋素物質之研究 |
指導教授: |
萬家茂
Wan, Jia-Mao |
學位類別: |
碩士 Master |
系所名稱: |
生命科學系 Department of Life Science |
畢業學年度: | 74 |
語文別: | 中文 |
中文關鍵詞: | 草蝦 、肝臟 、胰臟 、類甲釋素 、抗體結合沈澱試驗 、周邊環流系統 |
英文關鍵詞: | HPLC |
論文種類: | 學術論文 |
相關次數: | 點閱:225 下載:0 |
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本實驗之目的在於探求草蝦中類甲釋素(TRH )的存在性,以及其可能的分布情形,
並進而探究此類甲釋素與現已發現的甲釋素其相似與相異之處。
自市場購買活草蝦為15~18尾每斤(約35克至40克之間一尾),不分雌雄,購得後迅
速運送至實驗室(常溫下)並儘速取出各個器官,經甲醇(methanol)萃取後,測其
萃後液中類甲釋素之含量。
以甲醇與鹽酸兩種萃取方法,從事多量肝胰臟的萃取,比較兩種萃取結果的一致性,
類甲釋素並經色層分析(Sephadex G-25;G-10 )探究其與合成甲釋素的關係。
在實驗中並利用高效液相層析(HPLC),甲釋素分解速率從事多種性質探討。更進而
以抗體結合沈澱試驗,與周邊環流系統,來瞭解類甲釋素的免疫活性及生物活性。
於萃取液類甲釋素的測定中,也加入蛋白 抑制劑,來探求蛋白 的存在性,並確保
RIA 的可靠性。
實驗結果顯示草蝦經甲醇萃取後,其肝胰臟的萃取液含有多量的類甲釋素,約每克肝
胰臟含有5 ng類甲釋素的免疫活性,萃取液具有劑量反應現象,且與標準曲線平行。
以甲醇或鹽酸兩種萃取方法,來萃取肝胰臟,其萃取過程雖然差異很大,但其結果是
相一致的,萃取液均具有劑量反應現,且見標準曲線平行,經測試每克肝胰臟都約含
有5 ng類甲釋素的免疫活性。
以周邊環流系統,來瞭解類甲釋素是否具有生物活性,可看出類甲釋素具有生物活性
,而且類甲釋素的生物活性比其免疫活性要高。
經抗體結合沈澱試驗,萃取液中類甲釋素的免疫活性可以降低十倍以上。但將經沈澱
作用後的上層液拿來作生物活性測定,發現其生物活性不但沒有降低,反而有升高的
趨勢。
類甲釋素經色層分析(Sephadex G-25 )與(Sephadex G-10 ),發現類甲釋素的免
疫活性峰,可與蛋白質峰明顯分開,並且與放射性標示的125I-TRH峰並不在同一位置
,萃取的類甲釋素析出比較快,可能其分子量,比合成甲釋素要大些。
在高效液相層析中,由於萃取液中蛋白質或多胜 仍含量太多,因此無法得到一高純
度的類甲釋素胜 峰,但由合成甲釋素的紫外線(UV)胜 峰,與萃取液中類甲釋素
免疫活性峰相對照,可看出萃取的類甲釋素比合成甲釋素甲析出,由於析出溶液為極
性溶液,所以萃取的類甲釋素具有較高的極性。
萃取液中加以正常鼠血清,做甲釋素分解速率的探討,發現萃取的類甲釋素經25分鐘
,37℃的培育,其類甲釋素的免疫活性不受影響,但合成甲類素,卻已被分解,僅剩
原來1.5 %的免疫活性。顯示,萃取液中類甲釋素,不為血清中去氨 所作用,其化
學結構可能不同能合成甲釋素。