研究生: |
周瑞琪 ZHOU, RUI-QI |
---|---|
論文名稱: |
水稻懸浮培養細胞水解酵素之誘導研究 Study on the induction of hydrolytic enzymes in suspension-Cultured cells of rice |
指導教授: |
童武夫
Tong, Wu-Fu |
學位類別: |
碩士 Master |
系所名稱: |
生命科學系 Department of Life Science |
畢業學年度: | 80 |
語文別: | 中文 |
論文頁數: | 74 |
中文關鍵詞: | 酵素 、細胞 |
論文種類: | 學術論文 |
相關次數: | 點閱:169 下載:0 |
分享至: |
查詢本校圖書館目錄 查詢臺灣博碩士論文知識加值系統 勘誤回報 |
本論文以水稻台北309(Oryza sative cv. Taipei309)懸浮培養細胞為研究材料,採
討水稻胞不同培養基配方中,對於五種素活性表現的誘導情形。二種分泌性酵素為蛋
白分解酵素(Proteinase)、α -和β -澱水解酵素(α-、β -Amlase) ;與二種存在
於細胞內之過氧物素(Peroxidase)和苯丙氨酸解氨酵素( Phenylalanine ammonia-l-
yase) 。於MS培養基中添加吉貝素(Gibberellin,GA)、真菌抽出物(來源:Rhizocto-
nia solani 之菌絲體)、氯化鈉(NaC1),和以酪蛋白(Casein)取代原先MS培養基原有
氮源成份再添加GA後,所測得蛋白分解酵素之活性比正常MS培養基者活性高;故可得
知:於上述六種處理條件中,皆能夠誘導水稻細胞之培養基中蛋白分解酵素活性。
上述誘導條件下,例如:GA、真菌抽出物、與6-Benzylaminopurine(BAP)和以Gluco-
se取代Sucrose ,亦能誘導α -與β -澱粉水解酵素活性增高;第九天培養基中之糖
量耗盡呈現缺糖後,於第十一天二種澱粉水解酵素活性達到最高。
將水稻懸浮培養細胞施以完全黑暗處理,或於MS培養基中添加真菌抽出物(來源;同
上),結果測得細胞內之過氧物酵素活性比正常MS培養條件下者高。在完全黑暗條件
中、UV光照射二小時,或於MS培養基中添加真菌抽出物之細胞內苯丙氨酸解氨酵素活
性會被誘導而昇高;其中經UV光照射後之活性比完全黑暗處理者高,而完全黑暗處理
過之活性又比常培艱光照條件下所測得者高。
萃取水稻細胞之Total RNA ,以Slab Blot 和探針雜交分析合成蛋白分解酵素之mRNA
含量,結果顯示:第一、三、五天之mRNA含量,以四種處理:即於MS培養基中添加GA
、NaCl、真菌抽出物、和Casein加GA所分析出之mRNA含量明顯地常MS培養基者多。
以硫酸銨分割後蛋白分解酵素之比活性(Specific Acyivity) 增高約2.5 倍,再經D-
EAE-Sephacel管柱層析純化測得之比活性則增高約6.8
倍。最適合此種蛋竹白分解酵素作用之pH值為3.5 ,而最適合溫度則為45℃;由其耐
熱性分析得知:於55℃中作用六十分鐘後仍有活性。再以四種蛋白分解酵素抑制劑,
即:Leupeptin 、NEM 、pHMB、PMSF) 分析得知:水稻培養基中之蛋白分解酵素為一
帶有SH活性基之蛋白分解酵素。