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研究生: 周瑞琪
ZHOU, RUI-QI
論文名稱: 水稻懸浮培養細胞水解酵素之誘導研究
Study on the induction of hydrolytic enzymes in suspension-Cultured cells of rice
指導教授: 童武夫
Tong, Wu-Fu
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 生命科學系
Department of Life Science
畢業學年度: 80
語文別: 中文
論文頁數: 74
中文關鍵詞: 酵素細胞
論文種類: 學術論文
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  • 本論文以水稻台北309(Oryza sative cv. Taipei309)懸浮培養細胞為研究材料,採
    討水稻胞不同培養基配方中,對於五種素活性表現的誘導情形。二種分泌性酵素為蛋
    白分解酵素(Proteinase)、α -和β -澱水解酵素(α-、β -Amlase) ;與二種存在
    於細胞內之過氧物素(Peroxidase)和苯丙氨酸解氨酵素( Phenylalanine ammonia-l-
    yase) 。於MS培養基中添加吉貝素(Gibberellin,GA)、真菌抽出物(來源:Rhizocto-
    nia solani 之菌絲體)、氯化鈉(NaC1),和以酪蛋白(Casein)取代原先MS培養基原有
    氮源成份再添加GA後,所測得蛋白分解酵素之活性比正常MS培養基者活性高;故可得
    知:於上述六種處理條件中,皆能夠誘導水稻細胞之培養基中蛋白分解酵素活性。
    上述誘導條件下,例如:GA、真菌抽出物、與6-Benzylaminopurine(BAP)和以Gluco-
    se取代Sucrose ,亦能誘導α -與β -澱粉水解酵素活性增高;第九天培養基中之糖
    量耗盡呈現缺糖後,於第十一天二種澱粉水解酵素活性達到最高。
    將水稻懸浮培養細胞施以完全黑暗處理,或於MS培養基中添加真菌抽出物(來源;同
    上),結果測得細胞內之過氧物酵素活性比正常MS培養條件下者高。在完全黑暗條件
    中、UV光照射二小時,或於MS培養基中添加真菌抽出物之細胞內苯丙氨酸解氨酵素活
    性會被誘導而昇高;其中經UV光照射後之活性比完全黑暗處理者高,而完全黑暗處理
    過之活性又比常培艱光照條件下所測得者高。
    萃取水稻細胞之Total RNA ,以Slab Blot 和探針雜交分析合成蛋白分解酵素之mRNA
    含量,結果顯示:第一、三、五天之mRNA含量,以四種處理:即於MS培養基中添加GA
    、NaCl、真菌抽出物、和Casein加GA所分析出之mRNA含量明顯地常MS培養基者多。
    以硫酸銨分割後蛋白分解酵素之比活性(Specific Acyivity) 增高約2.5 倍,再經D-
    EAE-Sephacel管柱層析純化測得之比活性則增高約6.8
    倍。最適合此種蛋竹白分解酵素作用之pH值為3.5 ,而最適合溫度則為45℃;由其耐
    熱性分析得知:於55℃中作用六十分鐘後仍有活性。再以四種蛋白分解酵素抑制劑,
    即:Leupeptin 、NEM 、pHMB、PMSF) 分析得知:水稻培養基中之蛋白分解酵素為一
    帶有SH活性基之蛋白分解酵素。

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