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| 研究生： |
蕭禎慧 XIAO, ZHEN-HUI |
|---|---|
| 論文名稱： |
BACILLUS CIRCULANS β-澱粉水解酵素基因在大腸桿菌的選殖 |
| 指導教授： |
周德源
Zhou, De-Yuan |
| 學位類別： |
碩士 Master |
| 系所名稱： |
生命科學系 Department of Life Science |
| 畢業學年度： | 76 |
| 語文別： | 中文 |
| 中文關鍵詞： | 澱粉 、基因 、大腸桿菌 |
| 英文關鍵詞： | BACILLUS-CIRCULANS-B, SDS-POLYACRYLAMIDE |
| 論文種類： | 學術論文 |
| 相關次數： | 點閱：121 下載：0 |
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以pBR322當載體，利用Escherichia coli選殖B. circulans β －澱粉基因，用以
研究細菌β －澱粉基因的構造、表現和分泌機制。先將B. circulans 染色體DNA
用Sau 3A 部分切割後，所以得5Kb 左右的DNA 片段，與經BamHI 切割的pBR322連接，
轉形到E. coli BNN45，構築完成B. circulans 基因庫。再利用碘液染色法於基因庫
中進行篩選，亦即在含有澱粉的LS平板染色，挑選有粉紅色環的菌株，該菌株經多次
轉移，仍然可以在含AP的LS平板穩定地分泌β－澱粉 。
經DNA-DNA 雜配證明其上4.95Kb的嵌入基因確實來自B. circulans，進一步做基因切
除拼圖，可以將嵌入基因縮小到2.25Kb的EcoRI-PstI片段，仍保有分泌β－澱粉的
生活。將E. coli 轉形株產生的澱粉與由B. circulans抽取的酵素做一比較，二者
均會水解澱粉，得到的小分子產物只有麥芽糖，而無葡萄糖。進一步在SDS-polyacry
lamide膠體電泳分離蛋白質後，經活性染色，發現澱粉分子量主要在62000Dalton
左右。為了深入了解β－澱粉基因素現和分泌的調節機制，有待分析其核序列，
這一部份工作正在進行中。
