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研究生: 陳思樺
論文名稱: 利用金奈米粒子做為siRNA的基因載體及將其應用在RNAi
Using Gold Nanoparticles as gene carrier for siRNA and their Application in RNAi
指導教授: 陳家俊
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2008
畢業學年度: 96
語文別: 中文
論文種類: 學術論文
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  • 摘要
    RNA干擾作用可以將相同序列的mRNA,有效的阻止基因表現。然而,在利用siRNA的研究和治療上的應用,最大的困難在於設計ㄧ個適合的載體運送siRNA。由於RNA容易被分解,因此在RNAi技術上,如何有效率的將siRNA轉殖到細胞內便是重要關鍵。在此我們利用4.5奈米的金奈米粒子做為siRNA的基因載體,可以避免siRNA被分解,而達到保護作用,而金奈米粒子藉由包覆ㄧ層具有陽離子的thiocholine使其表面帶正電荷。因為EGFP siRNA為負電荷,因此可以容易的和金奈米粒子結合。EGFP siRNA上標定的TAMRA,可以幫助我們在螢光顯微鏡下清楚得知EGFP siRNA的位置。結論,我們合成的正電荷金奈米粒子可以用來作為siRNA的保護劑並可應用於的siRNA基因傳輸。

    目錄 總目錄……………………………………………………………………I 圖表目錄……………………………………………………………… IV 中文摘要………………………………………………………………VII 英文摘要…………………………………………………………… VIII 第一章:序論……………………………………………………………1 1-1 引言………………………………………………………………1 1-2 奈米材料簡介……………………………………………………2 1-3 奈米材料合成……………………………………………………4 1-4 金奈米粒子製備…………………………………………………5 1-5 金奈米粒子基本特性……………………………………………8 1-6 金奈米粒子在生醫上的應用……………………………………10 1-7 基因傳輸系統……………………………………………………12 1-7.1 病毒載體系統………………………………………………12 1-7.2 非病毒載體…………………………………………………13 1-8 RNA干擾現象……………………………………………………20 第二章:實驗……………………………………………………………23 2-1 研究動機與目的…………………………………………………23 2-2藥品與儀器……………………………………………………… 25 2-2.1 藥品…………………………………………………………25 2-2.2 儀器…………………………………………………………26 2-3 實驗步驟…………………………………………………………27 2-3.1 合成正電荷金奈米粒子……………………………………27 2-3.2 金奈米粒子結合siRNA…………………………………… 28 2-3.3 EGFP siRNA對金奈米粒子的性質影響………………… 30 2-3.4 金奈米粒子與EGFP siRNA結合之後的穩定性………….30 2-3.5 培養含增強型綠色螢光蛋白(EGFP)的COS-7細胞………31 2-3.6 金奈米粒子將標定TAMRA螢光染劑的siRNA攜帶入細胞……………………………………………………………32 2-3.7 金奈米粒子-EGFP siRNA 結合物抑制細胞中基因的表現……………………………………………………………32 第三章:結果與討論……………………………………………………34 3-1 正電荷金奈米粒子之性質分析…………………………………34 3-2 金奈米粒子與EGFP siRNA的結合……………………………38 3-3 金奈米粒子對於EGFP siRNA的保護性………………………43 3-4 金奈米粒子作為EGFP siRNA的基因載體……………………46 3-4.1 培養穩定的EGFP COS-7細胞……………………………46 3-4.2 利用螢光顯微鏡觀測siRNA是否進入細胞…………… 48 3-4.3 金奈米粒子-EGFP siRNA對EGFP基因表現的抑制……53 第四章: 結論…………………………………………………………...57 參考資料………………………………………………………………..59

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