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研究生: 李淑玲
shu-ling li
論文名稱: 益氣聰明湯之CE與HPLC分析
The analysis of Yi-chi-tsung-ming-tang in CE and HPLC
指導教授: 許順吉
Xu, Shun-Ji
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2000
畢業學年度: 88
語文別: 中文
論文頁數: 128
中文關鍵詞: 益氣聰明湯CEHPLC
英文關鍵詞: Yi-chi-tsung-ming-tang, CE, HPLC
論文種類: 學術論文
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  • 高效液相層析(HPLC)和毛細管電泳(CE)同屬液相分離技術,都有多種分離模式,為目前最常用來定量中藥材指標成分的分析方法。本研究以這兩種儀器開發益氣聰明湯的分析方法,並比較HPLC和CE兩分析方法的適用性。
    益氣聰明湯是由白芍、黃耆、人參、葛根、蔓荊子、升麻、甘草、黃柏等八種藥材所組成,在HPLC分析中,沖提系統之流動相A為20mM KH2PO4 (以10%H3PO4調整pH至3.74),流動相B為CH3CN/H2O = 80/20(V/V),利用Cosmosile 5C18-MS之分離管柱,以203、210及254 nm為偵測波長,利用梯度沖提系統可在80分鐘內分析益氣聰明湯的十七個指標成分(gallic acid、benzoic acid、oxypaeoniflorin、albiflorin、paeoniflorin、paeonol、formononetin、ferulic acid、caffeic acid、puerarin、daidzein、berberine、palmatine、jatrorrhizin、glycyrrhizin、18b-glycyrrhetinic acid及ginsenoside Rb1)。本文另以此分析法探討益氣聰明湯中各藥材與所成方劑之間各成分含量的消長關係,並藉此分析法評估益氣聰明湯濃縮製劑保存的安定性。
    在CE分析中,根據益氣聰明湯中各指標成分之不同性質而分成兩部分進行,即MEKC及CZE。在MEKC部分,利用含陰離子界面活性劑(50 mM SC)和有機修飾劑(氰甲烷)之緩衝溶液,可在15分鐘內分析其中albiflorin、paeoniflorin兩種指標成分;在CZE部分,硼酸鹽(pH=9.76)之緩衝溶液,可在55分鐘內分析其中十三種指標成分。該分析條件之選擇和評估亦一併探討。此外,以一種線上堆積法(Sweeping)進行茵陳蒿的分析,並比較此方法和傳統CE分析方法的差異和優劣。
    檢討益氣聰明湯之HPLC和CE的分析結果,發現在系統適宜性(包含再現性、回收率和偵測極限)、分析時間、基線穩定性及各吸收峰之理論板數等方面各有其優勢,兩者應可相輔相成、搭配使用。

    High-performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) are two well-known techniques in chemical analysis. Both have many separating modes and are used to assay Chinese herbal drugs. In the present study, two analyzing methods are established for assaying the constituents of the Chinese herbal preparation, Yi-chi-tsung-ming-tang. The suitability of the two methods was also evaluated and compared.
    Yi-chi-tsung-ming-tang comprises Paeoniae Radix, Astragali Radix, Ginseng Radix, Puerariae Radix, Viticis Fructus, Cimicifugae Rhizoma, Glycyrrhizae Radix and Phellodendri Cortex. In HPLC analysis, eighteen constituents of Yi-chi-tsung-ming-tang, including gallic acid, benzoic acid, oxypaeoniflorin, albiflorin, paeoniflorin, paeonol, formononrtin, ferulic acid, caffeic acid, puerarin, daidzein, berberine, palmatine, jatrorrhizin, glycyrrhizin, 18b-glycyrrhetinic acid and ginsenoside Rb1, were separated in 80 minutes by a Cosmosil 5C18-MS column with a linear gradient elution system containing phosphates and acetonitrile which was detected at 203 nm, 210 nm, and 254 nm. Moreover, the constituents in each component herb and the home-made preparation were investigated herein. The preservation stability of the commercially available Yi-chi-tsung-ming-tang preparations was also evaluated by the developed analysis method.
    In CE analysis, the analysis of Yi-chi-tsung-ming-tang was cut into two parts, MEKC and CZE, according to the properties of the constituents In MEKC, two constituents, albiflorin and paeoniflorin, could be separated in 15 minutes, using a buffer system containing anionic surfactants (40 mM SC) and acetonitrile as organic modifier. In CZE, thirteen constituents could be separated in 55 minutes, using a buffer system containing 20 mM borate(pH=9.76). The effects of the analysis parameters were also investigated herein. Moreover, one Chinese herb, Artemisiae Capillaris Herba, was analyzed by an on-line sample stacking CE method, sweeping. Also, the suitability and effects of the method were compared with those of the conventional CE methods.
    From the results of the analysis, it is concluded that HPLC and CE possesses their own beneficial effects in terms of the suitability of the system, analyzing time, stability of the base line, and the number of theoretical plates of each compound, respectively. HPLC and CE can complement each other in the analysis of Chinese herbal preparations.

    目 錄 圖目錄…………………………………………………………..………II 表目錄…………………………………………………………..………IV 中文摘要…………………………………………………………….…VI 英文摘要………………………………………………………………VIII 第一章 緒論 I - 1 前言…………………………………………..1 I - 2 高效能液相層析法………………………..3 I - 3 毛細管電泳分析法……………………………..6 I - 4 分析條件參數與適宜性之評估……………………23 第二章 益氣聰明湯之毛細管電泳分析 II - 1 前言…………………………………………………29 II - 2 實驗部分…………………………………34 II - 3 結果與討論…………………………………………40 第三章 樣品堆積法(Sweeping)之探討 III - 1 前言…………………………………………………62 III - 2 茵陳蒿微量成分之Sweeping分析……………..66 III - 3 Sweeping分析之結果與討論……………………...71 第四章 益氣聰明湯之高效能液相層析 IV - 1 前言…………………………………………78 IV - 2 實驗部分…………………………………………80 IV - 3 結果與討論…………………………………87 IV - 4 益氣聰明湯濃縮製劑之安定性評估……………..104 第五章 結論 V - 1 CE及HPLC之比較……………………………………113 V - 2 結論…………………………………………..119 參考文獻…………………………………………………...120 附錄 益氣聰明湯指標成分之UV吸收光譜圖…………………125 圖 目 錄 圖1-2-1 高效液相層析儀示意圖………………………………6 圖1-3-1 毛細管和離子層的說明圖………………………………9 圖1-3-2 電滲流形成之示意圖……………………………………...13 圖1-3-3 CE與HPLC之流型比較……………………………………12 圖1-3-4 帶電離子與不帶電分子在施加電場下的淌度…………...15 圖1-3-5 CE 儀器之示意圖…………………………………………16 圖1-3-6 電動力學層析原理示意圖…………………………………19 流程圖I CE樣品分析的流程圖………………………………………21 圖1-4-1 不對稱吸收峰示意圖……………………………………25 圖2-1-1 益氣聰明湯中各藥材之指標成份結構圖…………………34 圖2-3-1 硼酸鹽濃度與各成分遷移時間之關係………………….46 圖2-3-2 pH值與各成分遷移時間之關係……………………………47 圖2-3-3 SC濃度與各成分遷移時間之關係……….……………..48 圖2-3-4 氰甲烷濃度與各成分遷移時間之關係………..………59 圖2-3-5 pH值與各成分遷移時間之比較圖……..………………50 圖2-3-6 SC濃度與各成分遷移時間之比較圖…………………51 圖2-3-7 氰甲烷濃度與各成分遷移時間之比較圖………………...52 圖2-3-8 益氣聰明湯十三個指標成分之CZE電泳圖………………..53 圖2-3-9 益氣聰明湯萃取液之CZE電泳圖…………………………54 圖2-3-10 益氣聰明湯十個指標成分之MEKC電泳圖…………….…55 圖2-3-11 益氣聰明湯萃取液之MEKC電泳圖……..………………..56 圖3-1-1 在sweeping條件下分析物之EKC(electrokinetic chromatography)的進展過程…………………………………65 圖3-2-1 茵陳蒿之酚類成分結構圖…….………….……………68 圖3-3-1 茵陳蒿酚類標準品之sweeping電泳圖…………….………76 圖3-3-2 茵陳蒿萃取液之sweeping電泳圖…………….………..77 圖4-1-1 黃柏與人參藥材之指標成份圖…………………...…80 圖4-3-1 磷酸二氫鉀濃度對k’值的影響……………...…………93 圖4-3-2 pH值對k’值的影響…………….…………………….94 圖4-3-3 氰甲烷濃度對k’值的影響….……………………..……95 圖4-3-4 益氣聰明湯十七個指標成分之層析圖……..…….……102 圖4-3-5 益氣聰明湯萃取液之層析圖………………..……...…103 圖4-4-1 開放系統製劑成分含量與時間(天數)的關係……..109 圖4-4-2 室溫下密閉系統製劑成分含量與時間(週數)的關係…110 圖4-4-3 37℃下密閉系統製劑成分含量與時間(週數)的關係..111 圖4-4-4 45℃下密閉系統製劑成分含量與時間(週數)的關係…112 表 目 次 表1-3-1 分析用平板凝膠和不同內徑之57公分毛細管的表面積對體積之比值的比較………………………………………………..10 表1-3-2 評估影響CE分析的變數之間關係的參考圖表……………22 表2-3-1 SC濃度與各成分解析度之關係………………...………44 表2-3-2 SC濃度與各成分理論板數之關係……………………44 表2-3-3 氰甲烷濃度與各成分解析度之關係………………...45 表2-3-4 氰甲烷濃度與各成分理論板數之關係………………...45 表2-3-5 CZE及MEKC分析條件下各成分之再現性評估……………59 表2-3-6 CZE及MEKC分析條件下各成分之回收率及偵測極限………60 表2-3-7 益氣聰明湯中各成分定量的結果……………………...61 表3-3-1 SDS濃度與各成分解析度的關係……………...…….72 表3-3-2 注射秒數對茵陳蒿酚類成分遷移時間(分)的影響……..73 表3-3-3 注射秒數對茵陳蒿酚類成分解析度的影響……..…….73 表3-3-4 注射秒數對茵陳蒿酚類成分理論板數的影響…….……74 表3-3-5 茵陳蒿酚類成分之MEKC分析與sweeping分析的比較……..74 表4-2-1 益氣聰明湯分析方法之梯度沖提程式…….…………..82 表4-2-2 分離管柱的種類及其材質表…………………...……83 表4-3-1 不同管柱對各化合物對的解析度…………………...…88 表4-3-2 不同管柱在各化合物的理論板數及對稱係數……..…….88 表4-3-3 磷酸鹽濃度對化合物的解析度………………..…….90 表4-3-4 流動相(B)中氰甲烷/水之比例對理論板數的影響……92 表4-3-5 製劑分析條件之再現性評估…………………………...99 表4-3-6 製劑分析條件回收率及偵測極限…………………….…100 表4-3-7 各成分定量結果(mean ±SD, mg/g, n=3)…………..101 表4-4-1 開放系統各成分含量變化百分率(0天至73天)…………105 表4-4-2 室溫下密閉系統各成分含量變化百分率(0至8週)…..106 表4-4-3 37℃下密閉系統各成分含量變化百分率(0至8週)……107 表4-4-4 45℃下密閉系統各成分含量變化百分率(0至8週)….…107 表4-4-5 各成分含量在不同情況下的變化百分率(﹪)……..108 表5-1-1 HPLC與CE分析方法比較………………………………114 表5-1-2 HPLC與CE系統適宜性的評估…………………………115 表5-1-3 不同方法下,各化合物面積比之再現性(RSD,﹪)……116 表5-1-4 不同方法下,各化合物滯留時間/遷移時間之再現性(RSD,﹪)..116 表5-1-5 不同方法下,各化合物之回收率與偵測極限………...117 表5-1-6 各化合物於CE及HPLC分析方法之理論板數…………118

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